磷酸化
蛋白質磷酸化對於生理功能的調控相當重要,包含細胞內的訊息傳遞(signal transduction)、細胞生長(cell growth)、分化(differentiation)、代謝(metabolism)與細胞間溝通(cell-cell communication)等。Serine、Threonine、Tyrosine (主要出現於真核生物)與Histidine或Aspartate(主要出現於原核生物)的磷酸化與去磷酸化已知是調節酵素活性與訊息傳遞路徑的重要修飾作用。一般而言,磷酸化蛋白質在生物體中的含量偏低,且某些形式的磷酸化(如p-Ser與p-Thr)並不穩定。此外,磷酸化胜肽帶負電的特性,導致在質譜儀中的訊號常因非磷酸化胜肽的存在而被抑制。然而,某些分析方法已被發展進而增加磷酸化胜肽的量,如抗體辨識(antibody recognition)、金屬親和性層析(affinity tag chromatography)與化學修飾作用等。本公司利用金屬離子親和層析管柱(IMAC)或二氧化鈦(TiO2)層析方法增加磷酸化胜肽含量以鑑定磷酸化位點。此方法適用於重組蛋白或部分純化之蛋白樣品;而針對生物樣品內大規模的磷酸化蛋白質分析,我們同樣提供客製化分析服務,利用二步驟濃縮的策略(two-step enrichment),先純化磷酸化蛋白質,或直接進行酵素消化(protease digestion)並以陽離子層析(SCX)先對整體胜肽做分離,再進一步濃縮磷酸化胜肽,這樣的方法適用於分析鑑定大規模的磷酸化蛋白體,可大幅提高所鑑定到磷酸化蛋白質的數量。此方法亦可導入同位素標定,進而分析不同處理條件下,生物樣品中磷酸化蛋白質含量的改變。質譜分析與傳統跑膠與螢光標記方法不同的是,此分析是直接針對特定磷酸化位點做定量(site specific quantification),非常適合用在磷酸化激酶(kinase)與去磷酸酶(phosphatase)相關的訊息傳遞路徑之研究。