蛋白質初級結構

蛋白質研究的首要步驟為確定蛋白質初級結構。蛋白質的初級結構資訊決定其二級、三級與四級等高級結構,這也直接影響了蛋白質的生物功能。在進行蛋白質研究中,最重要的是確定標的蛋白質的胺基酸序列與基因序列所編碼轉換的序列(coding sequence)相同。我們的團隊精通於大部分研究初級結構的技術與方法,可提供您詳盡的初級結構分析服務方案。

蛋白質鑑定

對生物來源的蛋白質混和物進行蛋白質鑑定的方法常應用於蛋白質體研究。此分析方法是先將蛋白質樣品進行酵素水解,再由超高效液相層析儀搭配高解析質譜儀進行分析,所得到的圖譜資訊經由資料庫比對後,可鑑定出蛋白質身分。這種方析方法常應用於鑑定一維或二維電泳分離後的蛋白質膠點,或經液相層析部分純化之標的蛋白質樣品。我們致力在最短的分析時間內,提供最佳的數據品質(膠體電泳之蛋白質鑑定報告約在兩周內送出),以符合客戶的研發分析需求。

分子量測定

分子量測定是蛋白質生化特性分析中重要的參數,在分析重組蛋白質或確認蛋白質藥物的品質時相當有用。所測得的分子量也許會與理論值吻合,若不相同,可能是蛋白質的一級結構上發生了修飾或樣品組成是一混合物。結合Top Down分析技術,可以藉此分析蛋白質N端、C端序列,甚至鑑定出相關的修飾。分子量測定除了可用來確定樣品中的蛋白質身分外,亦能判斷不純物的存在,並獲得轉譯後修飾(PTMs)的資訊。其他更為詳盡的分子特徵分析,如蛋白質次結構基團的質量與醣基化程度等亦能透過分析不同的樣品製備方式(有無去醣基化)所達成。分子量測定對研究人員來說,經常是分析重組蛋白(包括單株抗體(mAbs)等醣基化蛋白質)的第一步,對生物製劑的品質確認來說相當重要。

胜肽圖譜鑑定

蛋白質藥物經酵素水解反應後,產生各種不同長短序列的胜肽鏈,再將水解後之蛋白質樣品以高效能液相層析儀(HPLC)分離並以紫外光光譜儀(UV Spectrometer)偵測,將分析所得之液相層析圖譜中各別胜肽波峰進行收集,或直接線上連接串聯式質譜儀分析各別波峰,鑑定波峰屬於蛋白質胺基酸序列中哪一段。液相層析條件將經過一系列重複性測試與確認,調整出最佳化的方法並將其應用在分析不同批次生產的蛋白質藥物,針對單一特定的蛋白質樣品,一旦分析方法建立,批次與批次間的分析比對將不再需要逐次進行質譜分析確認,僅需針對差異性的訊號波峰進行質譜鑑定即可。此種利用高效能液相層析-紫外光光譜儀(HPLC-UV)所得圖譜進行比對性分析之策略,可應用在不純物檢測、比較不同製程之產品等,作為批次之間品質管制之依據。更進一步適用於生物相似性藥品(Biosimilar)與原廠藥之分析比較。 

蛋白質末端定序

Top-down 是一個不經過酵素水解,直接將蛋白質樣品送進質譜儀進行分子量分析,並進一步碎裂以獲得N端或C端序列資訊之新穎性分析方法。通常必須搭配最先進,高準確度質量測定和高解析度的質譜儀如Orbitrap。
相對於傳統的Bottom-Up分析策略,Top-Down不經過酵素水解,可以反應最原始的蛋白質狀態,避免在冗長的水解過程中導入非原始的修飾作用。因此被認為在某些分析研究上有明顯的優勢,如N端與C端胺基酸序列定序、蛋白質異構物的分析、轉譯後修飾的鑑定等。Top-Down通常適用於純化後的樣品,對於生物製劑產品分析尤其有用。 

胜肽起始定序

胜肽起始定序方法適用於分析在公開資料庫無法比對得到資訊的未知蛋白質。這方法是將串聯式質譜分析所得圖譜資訊利用生物資訊演算法搭配必要之人工圖譜確認,推測出蛋白質或部分胜肽鏈之序列。推測所得之胺基酸序列可用做設計簡併性引子(degenerate primers),可進行基因選殖(gene cloning)或核酸定序。此方法亦可用於抗體的定性,無論是自然來源或是由融合瘤細胞取得,抑或是鑑定基因尚未解碼物種之蛋白質。此外,此法若結合胜肽圖譜比對等其他分析方法,將可獲得更多相關資訊。我們採用不同分析方法以確保提供您最正確的蛋白質序列資訊。